葡萄糖-6-磷酸(6PG)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
6PG (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又稱(chēng)6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物,廣泛存在于動(dòng)植物體和微生物中。在糖酵解的 步反應(yīng)中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過(guò)磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續(xù)糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其 個(gè)底物,該過(guò)程也是生成NADPH的主要途徑。此外,葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被儲(chǔ)存起來(lái)。
測(cè)定原理:
6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色,在450 nm下測(cè)定吸光值。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
6PG提取:
1、培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次), 8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,8000g,25℃離心10min,取上清待測(cè)。
3、血清(漿)等液體樣品:直接測(cè)定。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
