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帶您了解ELISA實驗操作過程的九點要素
日期：2024-09-20 07:37
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摘要：大部分elisa檢測均以血清為標本，那么在ELISA實驗過程中血清標本有哪些注意事項呢？
具體注意事項：
1、要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
2、血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。
3、冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
ELISA實驗過程中，操作過程中有一些易被人們忽視小細節(jié)，但這些小細節(jié)卻對試驗結果會產生直接影響。以下是ELISA控制操作過程的九點要素：
一、嚴格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。
二、加樣后及時放人孵箱。標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。
三、封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發(fā)，產生周邊現(xiàn)象從而導致“花板”的出現(xiàn)。
四、用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現(xiàn)象而導致“花板”的出現(xiàn)。
五、合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。
六、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
七、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
八、加樣時保持顯色劑不外流；A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產生氣泡。
九、應保證酶標板清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結果。
以上是ELISA實驗操作過程你了解了嗎？
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