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ELISA細胞裂解液詳細步驟
日期：2024-09-20 07:34
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摘要：常規(guī)樣本處理方式
血液樣本
血液樣本分為全血、血漿、血清三種。簡單描述:
全血: 全血=血漿+血細胞。
血漿: 全血加抗凝劑后離心分離出來的淡黃色液體是血漿。
血清: 全血不加抗凝劑而自然凝固后分離出來的，不含纖維蛋白原的淡黃色液體是血清。
血液樣本是ELISA/液相實驗常用的樣本。在收集血液樣本的過程中應避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質，將會出現(xiàn)非特異性顯色反應，導致檢測結果不準確，出現(xiàn)假陽性結果。另外，樣本還需要避免污染，因為其可能會導致樣本含有內(nèi)源性HRP，也會導致檢測結果不...
常規(guī)樣本處理方式
血液樣本
血液樣本分為全血、血漿、血清三種。簡單描述:
全血: 全血=血漿+血細胞。
血漿: 全血加抗凝劑后離心分離出來的淡黃色液體是血漿。
血清: 全血不加抗凝劑而自然凝固后分離出來的，不含纖維蛋白原的淡黃色液體是血清。
血液樣本是ELISA/液相實驗常用的樣本。在收集血液樣本的過程中應避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質，將會出現(xiàn)非特異性顯色反應，導致檢測結果不準確，出現(xiàn)假陽性結果。另外，樣本還需要避免污染，因為其可能會導致樣本含有內(nèi)源性HRP，也會導致檢測結果不準確。且要避免使用高血脂樣本。脂質會影響抗原抗體的結合，從而影響測值的準確性。
3.細胞裂解液
①吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細胞，再加入適量的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板上的細胞沖洗干凈(懸浮細胞可以省略該步驟);
②將細胞懸浮液收集到離心管中，在2-8C條件下，以1000xg離心5分鐘，再吸去培養(yǎng)基，用預冷PBS洗滌細胞3次;
③加入適量的預冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)，重懸細胞。添加比例:約1x106個細胞加入150-250uLPBS重懸細胞;
④使樣本在-20°C或-80°℃條件和室溫條件下反復凍融，重復凍融過程數(shù)次，直至細胞完全裂解。也可使用超聲波細胞破碎器，超聲處理懸浮液來裂解細胞;
⑤2-8°℃條件下，以1500xg離心10分鐘，去除細胞碎片，收集上清液。
血液樣本
血液樣本分為全血、血漿、血清三種。簡單描述:
全血: 全血=血漿+血細胞。
血漿: 全血加抗凝劑后離心分離出來的淡黃色液體是血漿。
血清: 全血不加抗凝劑而自然凝固后分離出來的，不含纖維蛋白原的淡黃色液體是血清。
血液樣本是ELISA/液相實驗常用的樣本。在收集血液樣本的過程中應避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質，將會出現(xiàn)非特異性顯色反應，導致檢測結果不準確，出現(xiàn)假陽性結果。另外，樣本還需要避免污染，因為其可能會導致樣本含有內(nèi)源性HRP，也會導致檢測結果不準確。且要避免使用高血脂樣本。脂質會影響抗原抗體的結合，從而影響測值的準確性。
3.細胞裂解液
①吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細胞，再加入適量的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板上的細胞沖洗干凈(懸浮細胞可以省略該步驟);
②將細胞懸浮液收集到離心管中，在2-8C條件下，以1000xg離心5分鐘，再吸去培養(yǎng)基，用預冷PBS洗滌細胞3次;
③加入適量的預冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)，重懸細胞。添加比例:約1x106個細胞加入150-250uLPBS重懸細胞;
④使樣本在-20°C或-80°℃條件和室溫條件下反復凍融，重復凍融過程數(shù)次，直至細胞完全裂解。也可使用超聲波細胞破碎器，超聲處理懸浮液來裂解細胞;
⑤2-8°℃條件下，以1500xg離心10分鐘，去除細胞碎片，收集上清液。