ELISA試劑盒的關(guān)鍵步驟-清洗

ELISA試劑盒實驗一般包含兩個或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結(jié)合(低親和力)的抗原-抗體復(fù)合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。之后，又是一輪洗滌。是添加底物并檢測信號。下面就讓上海通蔚生物為您講解關(guān)于洗滌的具體操作。
洗滌參數(shù):
一些參數(shù)會影響洗滌步驟的效果。個主要的參數(shù)是洗滌里。自動洗板機(jī)會分配洗滌液。如果你之前速遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌里調(diào)為高，是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌里必須相同。ELIS板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被里。行業(yè)中通常使用的包被里是2001。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會建議使用300u1洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說，洗滌里越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原里就越少。
洗滌次數(shù):

影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的里。當(dāng)然，洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強(qiáng)度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過，ELISA板的制造商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。

ELISA實驗雖然看起來有點簡單，但是這并不能成為我們掉以輕心的借口，實驗過程中應(yīng)該仔細(xì)檢查洗滌步驟，保證實驗的結(jié)果。
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