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通蔚生物流式細(xì)胞術(shù)詳細(xì)介紹
日期：2024-09-20 07:34
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摘要：通蔚生物流式細(xì)胞術(shù)詳細(xì)介紹
流式細(xì)胞術(shù)是一種基于檢測設(shè)備-流式細(xì)胞儀，對懸浮的單個活細(xì)胞或顆粒進(jìn)行快速、多參數(shù)檢測分析的一項生物學(xué)前沿技術(shù)。自20世紀(jì)120年代期發(fā)展起來，已在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，免疫相關(guān)的科研實驗室流式檢測已成為不可或缺的研究手段，而的流式則成為了自基因診斷技術(shù)以來又一嶄新的高技術(shù)檢測方法。
那么為了得到一個真實可靠、準(zhǔn)確靈敏的實驗結(jié)果，都有哪些必然的要素呢？我們把這些影響大的因素歸納為流式細(xì)胞術(shù)實驗的三大要素，分別為：流式試劑的搭配、檢測樣本的制備、流式儀器的應(yīng)用。今天帶大家來認(rèn)識下這三位流式界的好朋友。
熒光標(biāo)記抗體的搭配
在流式細(xì)胞術(shù)的免疫分型檢測中，有各種熒光素偶聯(lián)的抗體需要進(jìn)行選擇，特別是對于多色實驗來說，對熒光素的選擇搭配有著很高的要求，搭配效果直接影響到檢測效果，那么我們根據(jù)什么來進(jìn)行選擇呢？
首要硬性條件-流式細(xì)胞儀的配置，流式細(xì)胞儀的激光器和濾光片配置決定了我們可以選擇的偶聯(lián)熒光標(biāo)記的種類與數(shù)目。
目標(biāo)蛋白條件-染料的亮度與抗原表達(dá)量相適應(yīng)，目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平或豐度決定了熒光素的搭配。低表達(dá)的抗原，推薦搭配高亮度熒光素；高表達(dá)的抗原，推薦搭配低亮度熒光素。
熒光素條件-熒光素之間的光譜重疊小化，我們需要盡量選擇光譜重疊小的熒光素組合，光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時檢測會導(dǎo)致熒光溢漏，干擾檢測結(jié)果，需調(diào)節(jié)補償才能進(jìn)行準(zhǔn)確分析；還可優(yōu)先選擇不同激光激發(fā)的熒光素組合，如FITC搭配APC、PE搭配APC。
檢測樣本的制備
對于流式細(xì)胞分析而言，制備的樣本質(zhì)量的高低對終的檢測結(jié)果有很大的影響。如在免疫學(xué)和血液學(xué)中我們常遇到的以下樣本：外周血、骨髓、各類體液(如腦脊液、胸水、腹水)以及人體的組織(如**結(jié)、脾、肝等)，這些樣本的不同處理制備和保存方法極為關(guān)鍵。如何進(jìn)行保存更制備會更有利于流式檢測呢？
為大家解惑嘍！
外周血/骨髓-樣本制備與保存：采用抗凝采血管，一般采用肝素納或EDTA抗凝采血管，12h內(nèi)檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，若需保存一周以這則建議使用**細(xì)胞分離液分離出PBMC進(jìn)行凍存，待需要時再復(fù)蘇檢測。
體液(如腦脊液、胸水、腹水)-樣本制備與保存：采用肝素鈉抗凝管采集，收集需要對樣本進(jìn)行離心，并加入適量的stainingbuffer進(jìn)行洗滌、重懸，12h內(nèi)檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，如有細(xì)小沉淀，這機(jī)前建議采用300目尼龍網(wǎng)過濾再進(jìn)行檢測。
組織(如**結(jié)、脾臟、肝臟)-樣本制備與保存：切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中，采用機(jī)械法、酶處理法等方式將細(xì)胞輕柔的處理成單細(xì)胞懸液，盡量減少細(xì)胞損傷，12h內(nèi)檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，這機(jī)前建議采用300目尼龍網(wǎng)過濾再進(jìn)行檢測。過程中不要用甲醛、乙醇、表面活性劑等直接處理組織或單細(xì)胞樣本哦，咱得根據(jù)不同的實驗?zāi)康?，具體問題具體解決滴！
檢測儀器的選擇
用于流式細(xì)胞術(shù)的儀器在過去的幾十年里不斷“進(jìn)化”著，以滿足越來越多的科研與應(yīng)用需求，細(xì)胞群可以根據(jù)其熒光或散射光的特性進(jìn)行分析或分選。以下是市面這常見的幾款流式細(xì)胞儀-分析儀、分選儀：
市面這如此多種型號的流式細(xì)胞儀，但其基本結(jié)構(gòu)大同小異，我們主要圍繞流式分析儀來展開講解，分析型的流式細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測分析系統(tǒng)來組成。
上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實驗需求。
那么為了得到一個真實可靠、準(zhǔn)確靈敏的實驗結(jié)果，都有哪些必然的要素呢？我們把這些影響大的因素歸納為流式細(xì)胞術(shù)實驗的三大要素，分別為：流式試劑的搭配、檢測樣本的制備、流式儀器的應(yīng)用。今天帶大家來認(rèn)識下這三位流式界的好朋友。
熒光標(biāo)記抗體的搭配
在流式細(xì)胞術(shù)的免疫分型檢測中，有各種熒光素偶聯(lián)的抗體需要進(jìn)行選擇，特別是對于多色實驗來說，對熒光素的選擇搭配有著很高的要求，搭配效果直接影響到檢測效果，那么我們根據(jù)什么來進(jìn)行選擇呢？
首要硬性條件-流式細(xì)胞儀的配置，流式細(xì)胞儀的激光器和濾光片配置決定了我們可以選擇的偶聯(lián)熒光標(biāo)記的種類與數(shù)目。
目標(biāo)蛋白條件-染料的亮度與抗原表達(dá)量相適應(yīng)，目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平或豐度決定了熒光素的搭配。低表達(dá)的抗原，推薦搭配高亮度熒光素；高表達(dá)的抗原，推薦搭配低亮度熒光素。
熒光素條件-熒光素之間的光譜重疊小化，我們需要盡量選擇光譜重疊小的熒光素組合，光譜重疊嚴(yán)重的熒光素同時檢測會導(dǎo)致熒光溢漏，干擾檢測結(jié)果，需調(diào)節(jié)補償才能進(jìn)行準(zhǔn)確分析；還可優(yōu)先選擇不同激光激發(fā)的熒光素組合，如FITC搭配APC、PE搭配APC。
檢測樣本的制備
對于流式細(xì)胞分析而言，制備的樣本質(zhì)量的高低對終的檢測結(jié)果有很大的影響。如在免疫學(xué)和血液學(xué)中我們常遇到的以下樣本：外周血、骨髓、各類體液(如腦脊液、胸水、腹水)以及人體的組織(如**結(jié)、脾、肝等)，這些樣本的不同處理制備和保存方法極為關(guān)鍵。如何進(jìn)行保存更制備會更有利于流式檢測呢？
為大家解惑嘍！
外周血/骨髓-樣本制備與保存：采用抗凝采血管，一般采用肝素納或EDTA抗凝采血管，12h內(nèi)檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，若需保存一周以這則建議使用**細(xì)胞分離液分離出PBMC進(jìn)行凍存，待需要時再復(fù)蘇檢測。
體液(如腦脊液、胸水、腹水)-樣本制備與保存：采用肝素鈉抗凝管采集，收集需要對樣本進(jìn)行離心，并加入適量的stainingbuffer進(jìn)行洗滌、重懸，12h內(nèi)檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，如有細(xì)小沉淀，這機(jī)前建議采用300目尼龍網(wǎng)過濾再進(jìn)行檢測。
組織(如**結(jié)、脾臟、肝臟)-樣本制備與保存：切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中，采用機(jī)械法、酶處理法等方式將細(xì)胞輕柔的處理成單細(xì)胞懸液，盡量減少細(xì)胞損傷，12h內(nèi)檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，這機(jī)前建議采用300目尼龍網(wǎng)過濾再進(jìn)行檢測。過程中不要用甲醛、乙醇、表面活性劑等直接處理組織或單細(xì)胞樣本哦，咱得根據(jù)不同的實驗?zāi)康?，具體問題具體解決滴！
檢測儀器的選擇
用于流式細(xì)胞術(shù)的儀器在過去的幾十年里不斷“進(jìn)化”著，以滿足越來越多的科研與應(yīng)用需求，細(xì)胞群可以根據(jù)其熒光或散射光的特性進(jìn)行分析或分選。以下是市面這常見的幾款流式細(xì)胞儀-分析儀、分選儀：
市面這如此多種型號的流式細(xì)胞儀，但其基本結(jié)構(gòu)大同小異，我們主要圍繞流式分析儀來展開講解，分析型的流式細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測分析系統(tǒng)來組成。
上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實驗需求。