β-半乳糖苷酶(β-GAL)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解,此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長(zhǎng)釋放儲(chǔ)存的能量,還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時(shí)細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,釋放自由的半乳糖。
測(cè)定原理:
β-GAL分解對(duì)-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在400nm有 吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算β-GAL活性。
自備用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取:
1、或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液等液體樣本:直接檢測(cè)
