纖維素含量(CLL)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
纖維素是由葡萄糖組成的大分子多糖,通常與半纖維素、果膠和木質(zhì)素結(jié)合在一起,是植物細(xì)胞壁的主要結(jié)構(gòu)成分。纖維素是一種重要的膳食纖維,是自然界中分布廣、含量 一種多糖。
測(cè)定原理:
纖維素為β-葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在強(qiáng)酸作用下,可脫水生成β-糠醛類化合物。β-糠醛類化合物與蒽酮脫水縮合,生成糠醛衍生物。顏色的深淺可間接定量測(cè)定纖維素含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。
樣品的前處理:
1、細(xì)胞壁的提取:取約0.3g樣本,加入1mL 80%乙醇,室溫快速勻漿,90℃水浴20min(加熱過程中EP管可能爆開,建議用膠帶封口或使用防爆EP管),冷卻至室溫,6000g 25℃離心10min,棄上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(渦旋振蕩2min左右,6000g 25℃離心10min,棄上清即可),沉淀即為粗細(xì)胞壁,加入1mL試劑一(去除淀粉)浸泡15小時(shí),6000g 25℃離心10min,棄上清,將沉淀干燥,稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)。
2、纖維素的提取:稱取烘干的CWM 約5mg,加入0.5mL蒸餾水充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬,可先研碎后再加入0.5mL蒸餾水勻漿,或者用勻漿器勻漿),勻漿液轉(zhuǎn)移至EP管中,用蒸餾水定容至0.5mL,置于冰水浴中,緩慢加入0.75mL濃硫酸,混勻,冰水浴中靜置30min。8000g 4℃離心10min,取上清液,用蒸餾水稀釋20倍后待測(cè)。
