6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶(6PGDH)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
注 意： 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，與能量的平衡、生長(zhǎng)速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
測(cè)定原理：
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+沒有；通過測(cè)定340nm吸光度增加速率，計(jì)算6PGDH活性。
自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
粗酶液提?。?br>
1、細(xì)胞或組織樣品的制備：
培養(yǎng)細(xì)胞：先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為1000~5000：1的比例（建議2000萬或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm。
2將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3. 取96孔板，依次加入10μL樣本190μL試劑一，于340nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化，第10 s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2?！鰽=A2-A1
注意：空白管只需要做一次。
