磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
PEPC(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮-酸與二氧-化-碳-反應(yīng)生成草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶,對(duì)三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要作用。
測(cè)定原理:
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮-酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,蘋果-酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋-果-酸和NAD+,在340nm測(cè)定NADH減少速率,計(jì)算PEPC活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體30 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:液體10 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前加入4mL蒸餾水充分溶解待用;現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入5mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五 :原液20μL×1支,4℃保存;
試劑五:稀釋液10mL×1瓶,4℃保存;