結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測試盒
測定方法: 分光光度法
測定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長反應(yīng),主要負責直鏈淀粉的合成。
測定原理:
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP;進一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測定NADPH的增加量,可以計算GBSS活性。
需自備的的儀器和用品:
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體60mL×2瓶,4℃保存;
試劑一:50mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入14mL試劑一充分混勻備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入8mL試劑一充分混勻備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入17mL試劑一充分混勻備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑五:液體×1支,-20℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入1mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
粗酶液制備
稱取0.1~0.2g組織(建議稱取約0.1g組織),加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g ,4℃離心10min,棄上清,在沉淀中加入1mL提取液充分混勻,置冰上待測。