海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒
測定方法: 分光光度法
測定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注?意: 正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α,α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖,廣泛存在于酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機體中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩(wěn)定性。另外,它本身具有很強的吸水性,使它在生物體內(nèi)具有抗脫水作用,在逆境條件下可通過識別外界刺激、產(chǎn)生和傳遞信號、基因表達和代謝調(diào)節(jié)來保護植物免受環(huán)境的傷害。
植物體內(nèi)主要以葡萄糖為底物合成海藻糖,該反應(yīng)首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖反應(yīng)生成中間產(chǎn)物6-磷酸海藻糖,再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose6-phosphate phosphatase,TPP)的作用下去磷酸化,生成海藻糖。因此,測定TPS活性對于研究植物逆境具有重要意義。
測定原理:
TPS 催化 UDPG 與 G6P 生成海藻糖-6-磷酸,同時產(chǎn)生 UDP;UDP 在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化 NADH 為 NAD+,NADH 的下降速率與 UDP 含量成正比,通過 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 10mL 試劑五溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 25mL 試劑五溶解;現(xiàn)配現(xiàn)用;
試劑三:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存;臨用前加入 0.1mL 試劑五溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑四:100μL×1 瓶,4℃避光保存;臨用前低速離心,以防止試劑沾在管壁;試劑五:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
工作液的配制:臨用前,先配置好 1 瓶試劑二和試劑三,然后在試劑二瓶中加入 25μL 試劑三和 25μL 試劑四,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。