產品名稱：人免疫缺陷病毒II型RT-PCR試劑盒

人免疫缺陷病毒II型RT-PCR試劑盒
產品及特點： 
人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus; HIV)，即艾滋病(AIDS，獲得性免疫缺陷綜合征)病毒，是造人類免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒。它是一種感染人類免疫系統(tǒng)細胞的慢病毒(Lentivirus)，屬逆轉錄病毒的一種。其中人類免疫缺陷病毒 I 型(感染)在一類致癌物清單中、人類免疫缺陷病毒 2 型(感染)在 2B 類致癌物清單中。本產品用于在科研領域快速定量檢測人免疫缺陷病毒 II型。
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據(jù)人免疫缺陷病毒II型的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
規(guī)格及成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋)
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

注：為避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供專一的DNA 片段作為陽性對照。 
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。

人免疫缺陷病毒II型RT-PCR試劑盒

使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 人免疫缺陷病毒II型 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋)
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	人免疫缺陷病毒II型 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

4.上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數(shù)為:

過程	溫度	時間
逆轉錄	42℃	30 min
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35個循環(huán)	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。