兔抗多克隆抗體效價(jià)檢測(cè)說明

日期：2024-09-20 09:33

瀏覽次數(shù)：272

摘要：

兔抗多克隆抗體效價(jià)檢測(cè)：

1、2個(gè)參照:陰性參照為預(yù)取血血清，均以1抗起始濃度稀釋(封閉稀釋液);陽性參照為以前陽性血清

2、于96孔板中每孔滴加100ul，1ug/ml抗原，于4℃過夜，也可以37℃孵育2小時(shí)。

3、倒掉抗原溶液，每孔加入200ul的封閉液，4℃過夜或者37℃孵育2小時(shí)。

4、倒去封閉液，在吸水紙上拍打盡量吸干殘留液體,用洗滌液洗板三次,每次盡量拍干殘留液體,若要放置一段時(shí)間, 37℃烘干并用封口袋封好于-20℃存放。

5、取包被好的96孔板，**孔加入陰性參照液100ul，**孔加入陽性參照液100ul，第三孔加入1:500的待測(cè)抗血清，后續(xù)各孔在此基礎(chǔ)上倍比稀釋，于37℃孵育1 小時(shí)。

6、倒掉液體，用洗滌液洗板三次，拍干。每孔加入100ul的HRP標(biāo)記的小鼠抗兔IgG（1：2000稀釋），于37℃孵育45分鐘。

7、倒掉液體，用洗滌液洗板三次，拍干。每孔加入100ul的TMB底物（Sigma 單組份TMB ）37℃孵育5—20分鐘(根據(jù)顏色深淺來決定顯色的時(shí)間)。

8、每孔加入50ul的終止液（2N H2SO4），在酶標(biāo)儀上讀取波長(zhǎng)450nm處的吸光值。

抗體效價(jià)檢測(cè)達(dá)到1萬以上后可以對(duì)兔子進(jìn)行終放血。