小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒的操作步驟

小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒的操作步驟

背景[1-3]
小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒用于測(cè)定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)水平。用純化的小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)，再與HRP標(biāo)記的小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)濃度。

小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒
樣本處理要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒的操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。